Estudio del efecto del complejo hexafluorofosfato de 1,1-bis (difenilfosfino)ferroceno piridina-2-tiolato-1-óxido de M(II) en Trypanosoma cruzi mediante análisis global del transcriptoma

La enfermedad de Chagas es una zoonosis potencialmente letal que afecta principalmente a la población rural y marginal de Latinoamérica. Su agente etiológico es el parásito protozoario Trypanosoma cruzi, un organismo unicelular digenético que se transmite al hospedero mamífero, donde se desarrolla la patología, a través de insectos triatominos hematófagos que funcionan como vectores. Está clasificada como una enfermedad “descuidada” dado que no existen vacunas disponibles. Los tratamientos actuales se basan únicamente en el uso de dos fármacos de amplio espectro, Benznidazol y Nifurtimox, con severos efectos secundarios por su alta toxicidad, por lo que se hace necesario el desarrollo racional de nuevos fármacos antichagásicos. En este contexto, el grupo de la Dra. Gambino sintetizó complejos de paladio y platino, y recientemente moduló su actividad disminuyendo la citotoxicidad contra células normales de mamífero. Mediante ensayos enzimáticos con extractos totales de T. cruzi, se ha propuesto que el mecanismo de acción de estos compuestos se da por inhibición en la actividad de la enzima fumarato reductasa dependiente de NADH (FRD). Si bien los resultados muestran que la actividad de esta enzima se ve afectada en presencia de los compuestos, al tratarse de ensayos en extractos proteicos existe la posibilidad de que los mismos puedan estar afectando otros procesos que contribuyen directa o indirectamente a la obstrucción del crecimiento del parásito, además del efecto inhibitorio sobre la enzima FRD. Surge entonces la necesidad de realizar aproximaciones “ómicas” para identificar las diferentes vías que podrían estar involucradas en el mecanismo de inhibición del crecimiento de T. cruzi como consecuencia de la presencia de los compuestos antichagásicos, y que efecto ejercen sobre el metabolismo de los parásitos. En este proyecto planteamos analizar el cambio transcriptómico a nivel global en parásitos sometidos a los compuestos antes mencionados con respecto a parásitos control, para identificar posibles vías metabólicas afectadas, las cuales podrían ser potenciales blancos de acción de drogas antichagásicas. En forma complementaria, y con el fin de profundizar en el estudio de la acción de estos compuestos, se estudiará el mecanismo de muerte celular que inducen estos compuestos mediante citometría de flujo a través del uso de sondas fluorescentes tales como anexina V y ioduro de propidio, como marcadores de apoptosis temprana y necrosis.