Estudio bioquímico y funcional del factor de virulencia viral: la fosfatasa en tirosina del virus Orf, agente causal del ectima contagioso en ovinos.

Existen numerosas evidencias que demuestran que las fosfatasas de diversos patógenos intracelulares como los virus pueden actuar como factores de virulencia defosforilando residuos de proteínas de las células infectadas. En células eucariotas la fosforilación/defosforilación juega un rol crucial en la regulación del ciclo celular y en la modulación de la respuesta inmune frente a diferentes patógenos, por lo cual es extremadamente importante dilucidar cuáles son las vías de señalización que estos patógenos interfieren durante la infección. Nuestro interés está focalizado en la fosfatasa en tirosina del virus Orf (PTP-Orf) perteneciente al género Parapoxvirus (Familia Poxviridae). Este virus es el responsable del Ectima Contagioso, una enfermedad proliferativa de la piel y mucosas de gran importancia económica que afecta principalmente ovinos. Las reinfecciones son frecuentes y plantean la hipótesis de que la expresión de factores de virulencia que permiten evadir el sistema inmune tiene un rol esencial en la interacción del virus con el huésped. En este contexto la PTP-Orf es un buen candidato a estudio para determinar su rol en la interacción con componentes celulares. Además existen estudios estructurales y funcionales para su homóloga, la fosfatasa PTP-VH1 del virus Vaccinia, la cual se ha demostrado es esencial para la replicación del mismo. El objetivo general del presente proyecto es caracterizar el factor de virulencia PTP-Orf a nivel bioquímico y funcional. Para el abordaje de los objetivos obtendremos en forma recombinante la PTP-Orf para su posterior caracterización bioquímica, englobando estudios in vitro de cinética, estructurales y de aislamiento de posibles sustratos fisiológicos. Por otra parte, nos proponemos introducir la actividad fosfatasa del Virus Orf en las células blanco para estudiar su rol a nivel funcional y profundizar en la validación y búsqueda de sus sustratos eucariotas y las vías de señalización que modula. Para ello utilizaremos un sistema de transducción basado en vectores herpéticos de tipo amplicón. El hecho de que no existan estudios previos de la PTP-Orf hace que todos los resultados obtenidos en el marco de este proyecto sean novedosos y aporten a comprender mejor la biología de este patógeno viral. Los conocimientos generados podrán ser utilizados en la identificación de moléculas que inhiban su actividad y puedan ser evaluados como potenciales antivirales en estrategias alternativas de control de esta enfermedad.