Análisis de la influencia de PDCD4 en la síntesis de proteínas

La regulación de la síntesis proteica es un mecanismo clave en el control de la expresión génica. Diferentes enfermedades y anormalidades pueden ser causados por pérdidas o errores en los mecanismos de regulación traduccional que existen en las células. En particular, en células neuronales, ciertos aspectos aportan una mayor complejidad en la regulación de la expresión génica, como el alto nivel de polarización celular y el gran tamaño que éstas pueden alcanzar. De todas maneras, pocos reguladores traduccionales proteicos nuevos han sido descritos para neuronas. Programmed Cell Death 4 (PDCD4) es un gen supresor de tumores que regula negativamente la traducción, pero que en modelos neuronales recién comienza a ser explorado. En el presente proyecto de investigación nos proponemos evaluar la regulación traduccional que existe sobre ciertos ARNm en presencia y ausencia de PDCD4, a nivel de la población polisomal y expresión proteica, utilizando un modelo celular neuronal. Para realizar estos experimentos se utilizarán cultivos celulares de PC12, una línea celular capaz de diferenciar a un tipo neuronal. Estas células fueron modificadas genéticamente de manera tal que se puede inhibir la expresión de PDCD4 de manera inducible. Los ARNm regulados por PDCD4 que serán evaluados se obtendrán mediante el análisis de una serie de datos obtenidos previamente, en un estudio de screening de tipo ómico. En este sentido, se seleccionarán entre 5 y 10 candidatos para cuantificar su presencia y sus niveles de ARNm en fracciones de un gradiente polisomal, en presencia y ausencia del regulador traduccional PDCD4. También llevaremos adelante la estrategia de inmunofluorescencia, evaluando el producto proteico final y estable, de alguno de los genes blancos candidatos elegido previamente. Mediante un anticuerpo específico, obtendremos señales que serán visualizadas mediante microscopía confocal, para así comparar la condición sin PDCD4 y su control. A partir de las estrategias utilizadas, buscamos evidenciar el efecto regulador de PDCD4 sobre ARNm específicos, en el modelo celular neuronal. De esta manera, podremos demostrar el rol de regulador negativo traduccional de PDCD4 sobre dichos ARNm y contribuir al entendimiento de las funciones de este factor y sus blancos traduccionales.